问题628：如何使用病检蜡块制作科研组织芯片?

科研中制作组织芯片需要预先搜集、选取、制作大量的组织蜡块，切片染色后镜下定位，获取特定的小组织块，再制成组织芯片蜡块，经切片做成组织芯片，或向专业公司订购，需耗用大量的时间、人力和物力。充分利用科内所存档的外检蜡块，经定位，逐一将切片裱成组织芯片，便可解决科研中芯片标本来源不易的难题。在科研中，寻找到特定的组织制备芯片十分不易，而病理蜡块易于收集，并且基本上不会破坏外检蜡块的完整，可有效地利用存档外检蜡块做回顾性研究。特别是肿瘤的免疫组化、原位杂交等研究。不足的是须逐一的切片、裱片，但同时也避免了芯片蜡块在切片时的困难，这里介绍一种方法，供大家参照。

1.材料准备：活检蜡块(数量随科研需要而定)，自制直径0.5mm取样器及点好坐标的载玻片。

2.制作方法：

(1)蜡块的定位与划痕将切片在镜下选定需要的部位，用签字笔在蜡块相应位置上标记。再用自制直径0.5mm取样器在蜡块标记上轻轻旋转画出一圆形划痕。取样器为易拉罐皮卷制而成，并磨出利刃便可划出整齐的圆形划痕而不会过分损伤组织。

(2)载玻片的预标记经清洁打胶处理的载玻片或硅化载玻片背面用签字笔点上需裱贴切片的坐标，以便于裱出排列整齐的组织芯片。再用透明树胶薄薄覆盖签字笔坐标点，干燥后，避免水浴裱片时坐标点被洗掉。

(3)切片裱贴切取3μm切片数张，数量根据所需染色的需要确定，水浴中用钟表镊拨出切片划痕内的圆形小切片，依次裱贴在载玻片的坐标上，一个蜡块裱一坐标，待上一张切片烤干后，再裱下一张。水浴温度应控制在40℃，烤片箱温度60℃。如此，一张载玻片可裱贴直径0.5μm的切片40~50张。

(4)染色根据研究目的确定，主要为免疫组化染色、原位杂交染色。

3.组织芯片HE染色的标准化程序：

(1)用70℃烤30分钟。

(2)Mayer苏木素染色4分钟。

(3)伊红染色3分钟。

(4)结果判定：HE染色组织结构清楚，细胞核苏木素染色呈蓝色；核膜、染色质清晰可辨，胞质伊红染色层次分明，颜色鲜艳。